实时定量pcr的tm值相差多少可以接受?引物TM值和PCR程序问题

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表明相对含量越低) 普通组/Test1:28 实验组1/Test2:29 实验组2/Test3:30 这时候要设对照了,假设Test1为对照组(普通组),而pcr产物tm值是在实际操作中摸索出来的温度值引物tm值与pcr产物tm值这两个不同的引物当然退火温度也不相同,一般在设计引物的时候,程序就会显示出tm值是多少.在做pcr的时候,将退火温度设定的稍微低于tm值一点,降低引物的特异性,可能会好点.当然,做pcr有一定的运气成分,同样的条件有时能扩出基因来,有时候却不能.一般来说,一直无法p出基因的话,首先就要检查引物设计是否有问题,如果没有问题,或者以前p出来过.那么检查下退火温度,多试几个温度.再就是mg离子的浓度,模板不要太多.多尝试一下.总之,设定退火温度的时候略微比tm低一点,适当的调整,多多尝试,就好了.,当然是以普通组为对照 那么,引物TM值和PCR程序问题引物tm是设值和合成引物时的tm值,也就是理论值,实时定量pcr的tm值相差多少可以接受用2-△△ ct法算的话,假设检测A基因,相对含量为。

实时定量pcr的tm值相差多少可以接受


用2-△△ ct法算的话,应如何算? 假设检测A基因,CT分别为(这里记住CT越大,表明相对含量越低) 普通组/Test1:28 实验组1/Test2:29 实验组2/Test3:30 这时候要设对照了,假设Test1为对照组(普通组),当然是以普通组为对照 那么,相对含量为。

引物TM值和PCR程序问题


引物tm是设值和合成引物时的tm值,
也就是理论值。
而pcr产物tm值是在实际操作中摸索出来的温度值
引物tm值与pcr产物tm值这两个不同的引物当然退火温度也不相同,一般在设计引物的时候,程序就会显示出tm值是多少.在做pcr的时候,将退火温度设定的稍微低于tm值一点,降低引物的特异性,可能会好点.
当然,做pcr有一定的运气成分,同样的条件有时能扩出基因来,有时候却不能.一般来说,一直无法p出基因的话,首先就要检查引物设计是否有问题,如果没有问题,或者以前p出来过.那么检查下退火温度,多试几个温度.再就是mg离子的浓度,模板不要太多.多尝试一下.
总之,设定退火温度的时候略微比tm低一点,适当的调整,多多尝试,就好了.