表明相对含量越低） 普通组/Test1：28 实验组1/Test2：29 实验组2/Test3：30 这时候要设对照了,假设Test1为对照组（普通组）,而pcr产物tm值是在实际操作中摸索出来的温度值引物tm值与pcr产物tm值这两个不同的引物当然退火温度也不相同,一般在设计引物的时候,程序就会显示出tm值是多少.在做pcr的时候,将退火温度设定的稍微低于tm值一点,降低引物的特异性,可能会好点.当然,做pcr有一定的运气成分,同样的条件有时能扩出基因来,有时候却不能.一般来说,一直无法p出基因的话,首先就要检查引物设计是否有问题,如果没有问题,或者以前p出来过.那么检查下退火温度,多试几个温度.再就是mg离子的浓度,模板不要太多.多尝试一下.总之,设定退火温度的时候略微比tm低一点,适当的调整,多多尝试,就好了.,当然是以普通组为对照 那么,引物TM值和PCR程序问题引物tm是设值和合成引物时的tm值,也就是理论值,实时定量pcr的tm值相差多少可以接受用2-△△ ct法算的话,假设检测A基因,相对含量为。
实时定量pcr的tm值相差多少可以接受
用2-△△ ct法算的话，应如何算？ 假设检测A基因，CT分别为（这里记住CT越大，表明相对含量越低） 普通组/Test1：28 实验组1/Test2：29 实验组2/Test3：30 这时候要设对照了，假设Test1为对照组（普通组），当然是以普通组为对照 那么，相对含量为。
引物TM值和PCR程序问题
引物tm是设值和合成引物时的tm值,
也就是理论值。
而pcr产物tm值是在实际操作中摸索出来的温度值
引物tm值与pcr产物tm值这两个不同的引物当然退火温度也不相同,一般在设计引物的时候,程序就会显示出tm值是多少.在做pcr的时候,将退火温度设定的稍微低于tm值一点,降低引物的特异性,可能会好点.
当然,做pcr有一定的运气成分,同样的条件有时能扩出基因来,有时候却不能.一般来说,一直无法p出基因的话,首先就要检查引物设计是否有问题,如果没有问题,或者以前p出来过.那么检查下退火温度,多试几个温度.再就是mg离子的浓度,模板不要太多.多尝试一下.
总之,设定退火温度的时候略微比tm低一点,适当的调整,多多尝试,就好了.
